RNA直接調(diào)節(jié)大量細(xì)胞過程，觀測(cè)RNA可為研究人員帶來許多新的認(rèn)識(shí)。存在于特殊細(xì)胞以及這些細(xì)胞特殊位點(diǎn)中的RNA可以揭示潛藏在差別背后的機(jī)制。需要強(qiáng)有力的方法來熒光標(biāo)記和跟蹤活細(xì)胞中的RNA。

RNA成像也可以解答基因表達(dá)譜研究提出的一些問題。曾經(jīng)科學(xué)家們追蹤過一些轉(zhuǎn)錄物開展進(jìn)一步的研究。RNA原位雜交可以顯示基因如何在整個(gè)細(xì)胞群中表達(dá)，在同一個(gè)細(xì)胞中哪一對(duì)轉(zhuǎn)錄物一起增高和下降，一種轉(zhuǎn)錄物是否定位在特異的細(xì)胞類型中或是像樹突這樣的特殊區(qū)室內(nèi)。原位雜交還可以證實(shí)RNA干擾研究中一種轉(zhuǎn)錄物是否確實(shí)受到了抑制。

諸如熒光原位雜交（FISH）法、酶促共價(jià)標(biāo)記法的RNA可視化方法，需要將細(xì)胞固定，而不適用于活細(xì)胞成像。經(jīng)過修飾的RNA可與融合了熒光蛋白的特定RNA結(jié)合蛋白（例如MCP，PCP，λN或Cas）相結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)在活細(xì)胞中對(duì)目的RNA進(jìn)行標(biāo)記成像，這一方法甚至可實(shí)現(xiàn)單分子水平的RNA檢測(cè)。但是，未結(jié)合的熒光蛋白分子可在整個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)散，并產(chǎn)生較高背景的熒光。此外，將過大的蛋白捆縛在RNA上，是否會(huì)影響RNA的定位，穩(wěn)定性和行為仍有待商榷。

雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)本質(zhì)上是一種蛋白質(zhì)片段互補(bǔ)技術(shù)，是指將熒光蛋白多肽鏈在某些不保守的氨基酸處切開，形成不發(fā)熒光的 N?和 C?末端2 個(gè)多肽片段。將這 2 個(gè)熒光蛋白片段分別連接到 1 對(duì)能發(fā)生相互作用的目標(biāo)蛋白上，在細(xì)胞內(nèi)共表達(dá)或體外混合這 2 個(gè)融合蛋白時(shí)，由于目標(biāo)蛋白質(zhì)的相互作用，熒光蛋白的 2 個(gè)片段在空間上互相靠近互補(bǔ)，重新構(gòu)建成完整的具有活性的熒光蛋白分子，從而產(chǎn)生熒光。

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本申請(qǐng)解決了目前存在的需要將細(xì)胞固定，而不適用于活細(xì)胞成像等難題；結(jié)合雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)與RNA結(jié)合蛋白?熒光分子兩技術(shù)的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，旨在提供一種信噪比低的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)RNA分子的方法，本方法具有高效、簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本申請(qǐng)通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

一種檢測(cè)細(xì)胞RNA表達(dá)的方法，根據(jù)雙分子熒光互補(bǔ)原理，在熒光分子N端與C端融合表達(dá)不同的RNA結(jié)合蛋白或結(jié)構(gòu)域，兩個(gè)外源表達(dá)的RNA適配子通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則與待檢測(cè)RNA結(jié)合，而外源表達(dá)的兩RNA含有RNA結(jié)合蛋白結(jié)合序列，當(dāng)兩融合表達(dá)不同的RNA結(jié)合蛋白與它們結(jié)合時(shí)會(huì)發(fā)出熒光。

本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N檢測(cè)細(xì)胞RNA表達(dá)的方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具備以下優(yōu)點(diǎn)：

1、結(jié)合雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)與RNA結(jié)合蛋白?熒光分子兩技術(shù)的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，旨在提供一種信噪比低的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)RNA分子的方法，本方法具有高效、簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。

2、由于只有當(dāng)兩片段的熒光分子足夠靠近時(shí)才會(huì)發(fā)出熒光，與傳統(tǒng)技術(shù)，提高信噪比，適用研究培養(yǎng)細(xì)胞和動(dòng)物體內(nèi)RNA定位，定量等應(yīng)用。

3、該方法按照流行的分子生物學(xué)方法進(jìn)行，所需要的試劑和儀器均為常用，無需特殊購買。