水牛奶被譽為“奶中之王”，具有很高的營養(yǎng)價值，其中的蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、維生素和礦物質(zhì)等都是人體必須的營養(yǎng)元素，蛋白質(zhì)和氨基酸種類含量豐富，符合我國居民的健康飲食需求。研究表明，水牛奶的干物質(zhì)、乳蛋白、乳脂肪、維生素、礦物質(zhì)等主要營養(yǎng)成分均高于普通奶，水牛奶的總固形物質(zhì)分別是牛奶、人奶的1.67倍和1.64 倍，脂肪含量分別是牛奶、人奶的2倍以上。水牛奶蛋白是全價蛋白，主要由酪蛋白、乳清蛋白和少量的脂肪球膜蛋白組成，含有人體所需的必須氨基酸，氨基酸含量比牛奶高 31.6％，是營養(yǎng)豐富、高質(zhì)量的天然動物蛋白食品。水牛奶蛋白膠團直徑大，容易形成彈性膠體狀態(tài)和蛋白網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，在乳品加工上更具優(yōu)勢，特別利于干酪的生產(chǎn)。其他營養(yǎng)物質(zhì)、微量元素和維生素等含量均高于荷斯坦牛，是最接近于人乳的天然食品，素有“白色血液”之稱。

水牛奶因其營養(yǎng)價值高，逐漸受到消費者青睞。然而，由于水牛奶產(chǎn)量低，奶水牛種群數(shù)量少等因素影響，導(dǎo)致其奶源成本偏高，受經(jīng)濟利潤驅(qū)使，奶源造假事件層出不窮，不法商家利用其他動物奶源冒充水牛奶銷售，從而牟取高額利潤。這種摻假行為不僅損害消費者的合法權(quán)益，還會對牛奶過敏的消費者身體健康造成威脅。

近年來，乳品虛假宣傳被曝出，水牛奶源真實性的問題被社會重點關(guān)注。目前，水牛奶源真實性檢測缺乏有效的檢測方法，僅僅依靠蛋白質(zhì)含量測定、PCR檢測和液相色譜法，但這些方法存在準確度低、檢測周期長，操作復(fù)雜等缺點，例如，已公開的檢測畜類源性成分的多重?zé)晒舛縋CR試劑盒和檢測方法，主要通過提取樣品的DNA，實現(xiàn)對綿羊、山羊、牛、牦牛和水牛等6種畜禽的準確檢測。此方法具有較好的特異性，具有快速的特點，但這種方法也存在自身的缺陷，由于檢測的目標物是畜禽奶中的游離細胞的DNA，其含量受動物品種、生理狀態(tài)和健康條件的影響，環(huán)境微生物也會造成干擾。兩種或兩種以上的奶源摻雜時，PCR方法均能檢測到，對于奶源的真實來源判斷和摻雜比例缺乏更為有效的定量分析。高效液相色譜法能夠通過檢測水牛奶中的蛋白質(zhì)成分角度分析奶源來源，但不同物種的奶源蛋白質(zhì)相似性較高，且大分子蛋白質(zhì)在樣品處理中易降解，加之液相色譜法靈敏度低于液質(zhì)聯(lián)用法，對于摻假識別帶來較大的阻礙。因此，發(fā)明一種快速、高效、高靈敏度的定性定量檢測方法是有必要的。

本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題，并提供一種水牛奶特征肽及水牛奶鑒定方法，利用水牛奶特征肽可鑒定出待測水牛奶中是否含有純水牛奶以及含有的純水牛奶的比例，使用方便、快捷。

利用水牛奶特征肽鑒定水牛奶的方法，包括以下步驟：

S1、在待測物中加入蛋白質(zhì)沉淀劑，超聲、離心，取上清液超濾，得到分子量小于10KDa的超濾液，對所述超濾液進行脫鹽處理，得到脫鹽溶液，對所述脫鹽溶液進行液質(zhì)分析，采集多肽指紋圖譜；

S2、判斷S1中的多肽指紋圖譜是否含有水牛奶特征肽的離子信號：若含有水牛奶特征肽的離子信號，則說明待測物中含有水牛奶，若不含有水牛奶特征肽的離子信號，則說明待測物中不含有水牛奶。

S3、若S1中的多肽指紋圖譜含有水牛奶特征肽的離子信號，則測定待測物中水牛奶特征肽的峰面積，記為X；

S4、測定與待測物同重量份數(shù)的純水牛奶中水牛奶特征肽的峰面積，記為Y，則待測物中含有的純水牛奶比例為Y與X的比值。

本發(fā)明優(yōu)點如下：

 第一、本發(fā)明公開了一種水牛奶特征肽及水牛奶鑒定方法，利用水牛奶特征肽可鑒別待測物中是否含有純水牛奶以及待測物中含有的純水牛奶的比例，可用于檢測水牛奶是否摻假以及摻假比例，使用方便，檢測快速。

第二、本發(fā)明中采用酸性沉淀劑和鹽析沉淀劑相結(jié)合去除蛋白質(zhì)的方法，大大提高了干擾蛋白質(zhì)的去除效率，以內(nèi)源多肽作為檢測指標，相較常規(guī)的酶解方法，去除了繁瑣的酶切步驟，結(jié)合超聲萃取，提高了水牛奶中多肽的提取效率和操作時間，僅需60分鐘即可完成樣品制備和純化。

第三、本發(fā)明采用高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀作為檢測手段，只需要取樣微量的待測水牛?9奶樣品，即可達到有效檢測目的，nmol級(10 )內(nèi)源多肽的即可達到有效檢測的目的，檢測靈敏度高。

第四、本發(fā)明利用超高壓納升液相色譜分離，采用的色譜柱為Acclaim PepMap RSLC C18分析柱，該分析柱是小顆粒填料的多肽專用毛細管色譜柱，相對于其他方法，其保留時間穩(wěn)定無誤差，多次實驗重復(fù)，每次重復(fù)的保留時間和峰面積均保持一致，不僅可以通過水牛奶特征肽定性檢測待測水牛奶中是否含有純水牛奶，還可以通過水牛奶特征肽的峰面積精確定量待測水牛奶中純水牛奶的比例，進而確定摻雜其他奶源的比例，檢測重復(fù)性好，穩(wěn)定可靠。

第五、本發(fā)明建立了完善的水牛奶內(nèi)源多肽的分離方法及質(zhì)譜檢測方法，通過質(zhì)譜技術(shù)精確地識別水牛奶中所有的多肽信息，篩選了水牛奶特征多肽作為生物標志物，為水牛奶的質(zhì)量檢測提供了可靠的依據(jù)，保障了消費者的健康和權(quán)益。