角膜內(nèi)皮由于其細胞間緊密連接形成的屏障作用及鈉鉀泵功能從而維持了角膜的透明及厚度，對視力的保護作用至關(guān)重要，角膜內(nèi)皮細胞在體內(nèi)基本無法再生，而在外傷或外科創(chuàng)傷、屈光手術(shù)、早期穿透性或內(nèi)皮性角膜移植、內(nèi)皮營養(yǎng)不良或某些疾病應(yīng)激(如糖尿病或青光眼)時會導(dǎo)致角膜內(nèi)皮細胞的密度顯著降低，一旦角膜內(nèi)皮細胞的密度低于400～500細胞/mm2時，就會出現(xiàn)間質(zhì)水腫、角膜混濁、大皰性角膜病變和視力下降等級聯(lián)反應(yīng)。

隨著人口老齡化的來臨，糖尿病、青光眼、白內(nèi)障的發(fā)病率逐漸攀高，白內(nèi)障手術(shù)越來越普遍，而內(nèi)皮損傷是其常見的并發(fā)癥，內(nèi)皮損傷會導(dǎo)致患者致盲，目前主要依賴于角膜移植和DMEK/DSAEK手術(shù)(DMEK，Descemet membrane endothelial keratoplasty，角膜后彈力層撕除角膜內(nèi)皮移植術(shù)；DSAEK，后彈力層自動剝除角膜內(nèi)皮移植術(shù))，但是角膜移植和DMEK/DSAEK手術(shù)均依賴他人捐獻的角膜，由于供體數(shù)量極其有限，大多患者難以及時得到治療。

角膜組織工程技術(shù)的興起使體外重建出組織工程人角膜成為可能，而體外重建的組織工程人角膜基質(zhì)，作為捐獻角膜的替代物，已成為眾多角膜病盲患者通過角膜移植而復(fù)明的希望，體外培養(yǎng)人角膜內(nèi)皮細胞，種植于各種模擬人體內(nèi)角膜后彈力層及后基質(zhì)的生物材料上構(gòu)建組織功能角膜用于體內(nèi)移植，而其中脫細胞豬角膜基質(zhì)已經(jīng)作為人角膜基質(zhì)替代物進行了臨床試驗，其組織相容性、免疫原性及安全性均通過了測試，是現(xiàn)有的角膜組織工程技術(shù)制備較成熟、且應(yīng)用較廣泛的生物材料。

目前在使用豬角膜基質(zhì)前，通常需要先將豬角膜基質(zhì)切割成植片再使用，目前通常使用飛秒激光儀進行切割：先將豬角膜切割成厚度為不小于100μm的角膜內(nèi)皮片，再將角膜內(nèi)皮片進行脫細胞備用，但是，由于飛秒激光儀的價格較高，操作較復(fù)雜，導(dǎo)致角膜內(nèi)皮片的成本較高，增加了患者的醫(yī)療成本，同時，厚度不小于100μm的角膜內(nèi)皮片由于厚度較厚，在手術(shù)后與患者的眼部細胞融合性較差，容易導(dǎo)致手術(shù)失敗。

本發(fā)明的目的在于提供一種超薄APCS植片的制備方法，能夠在減小角膜內(nèi)皮片厚度的基礎(chǔ)上，降低角膜內(nèi)皮片的成本，提高手術(shù)成功率。

為達到以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種超薄APCS植片的制備方法，包括以下步驟：

對脫細胞豬角膜基質(zhì)進行清潔并脫水，將冰凍切片機預(yù)冷至低于20℃，在樣品托上涂抹OCT包埋劑并修平，將脫水后的基質(zhì)放置在OCT包埋劑上并冷凍，設(shè)置冰凍切片機的切片厚度為20～60μm并進行切割，得到超薄APCS植片。

本發(fā)明的優(yōu)點在于：

本發(fā)明中的一種超薄APCS植片的制備方法，過冷凍切片機對脫細胞豬角膜基質(zhì)進行切割，得到厚度為20～60μm的超薄APCS植片，該植片的厚度遠小于飛秒激光儀切割的植片厚度，能夠有效提高植片與患者眼部的融合性，提高手術(shù)的成功率，同時，冷凍切片機的成本較低，操作方法較簡單，能夠有效降低植片的制備成本，降低患者的醫(yī)療成本。